1、指代不同：叔叔在古代词语中，称父亲的二弟为叔父，称父亲的弟媳为叔母，称丈夫的弟弟为叔叔。而伯伯可以称比自己父亲年纪大的男性长辈，或对朋友父亲的尊称，如世伯、伯伯、阿伯亦是对一般中老年男性的称呼。

2、用法不同：叔叔称父亲的弟弟，女性对其丈夫的弟弟的称呼。伯伯一般叫父亲的哥哥，伯伯是一个亲属称谓，指父亲的哥哥，也叫伯父或阿伯，或简称伯。

3、性质不同：叔叔听起来年轻，如今在外面称呼年纪大的人为叔叔，叔叔已经成了一种敬称。而伯伯显得老，对于比自己父亲年纪大的人的礼貌称呼。